Taq Pol DNA Polymerase (+)MgCl2 (500 unidades)
Código: POL100S - Referência: TAQ POL
Taq Pol é a enzima DNA polimerase recomendada para reações de PCR de rotina. É otimizada para alta especificidade e garante mínima formação de produtos inespecíficos. O sistema de tampão é recomendado para PCR baseado em placa e pipetagem automatizada. A atividade replicativa de DNA acontece a 72˚C. Cataliza a polimerização de nucleotídeos em dupla fita de DNA na direção 5'→ 3' na presença de magnésio. Também possui atividade exonuclease no sentido 5'→ 3' dependente de polimerização, mas a atividade exonuclease 3'→ 5' é ausente.
Definição de unidade
Uma unidade é definida como a quantidade de enzima requerida para catalisar a incorporação de 10 nmoles de dNTPs em uma forma ácido-insolúvel em 30 minutos a 70 °C.
Amplificação superior - até 1 pg de molde
Amplificação até 5 kb
CONTEÚDO
Taq Pol (tampa azul)
5 unidades/µL Taq DNA polimerase em 20 mM Tris-HCl, 100 mM KCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0.5% Tween-20, 0.5% Nonidet P-40, 50% glicerol (v/v), pH 8.0 (25 °C)
Taq Reaction Buffer complete 10x (tampa vermelha)
200 mM Tris-HCl, 500 mM KCl, 20 mM MgCl2, pH 8.5 (25 °C)
MgCl2 Stock Solution (tampa amarela)
25 mM MgCl2
PROTOCOLO
Apenas para uso in vitro!
O procedimento de PCR descrito abaixo emprega volumes para uma reação de 50 μL. Para múltiplas reações, prepare um master mix contendo todos os componentes comuns a todos as reações e dispense o volume apropriado em cada tudo de PCR. Na sequência, adicione o DNA molde e os oligos respectivos.
Ensaio recomendado: 50 µL
| Componente | [ final ] | Volume |
| 10x Taq Reaction Buffer complete (tampa vermelha) | 1 X | 5 µL |
| 10 mM dNTPs | 200 µM | 1 µL |
| 10 µM Oligonucleotídeo senso | 0.2 µM | 1 µL |
| 10 µM Oligonucleotídeo antisenso | 0.2 µM | 1 µL |
| DNA molde | 10 pg - 1 µg** | variável |
| Taq Pol (tampa azul) | 1 - 2.5 unidades | 0.2-0.5 µL |
| Água grau PCR | q.s.p 50 µL | |
**DNA genômico: 1 ng-1μg; DNA plasmidial ou viral: 1 pg-1 ng
Otimização da concentração de MgCl2
O tampão de reação 10x concentrado contém 20 mM de MgCl2, resultando em 2 mM na reação, concentração recomendada para maioria das aplicações. Para otimização, adicione MgCl2 da solução estoque conforme indicado na tabela abaixo.
| MgCl2 Stock Solution | 1 µL | 2 µL | 4 µL |
| [ final ] MgCl2 | 2.5 mM | 3 mM | 4 mM |
Condições de ciclagem recomendadas
| Denaturação inicial | 95 °C | 1 min | 1 X |
| Denaturação | 95 °C | 15-30 s | 30 X |
| Hibridização1 | 45-68 °C | 15-30 s | |
| Elongação2 | 72 °C | 30 s - 4 min | |
| Elongação final | 72 °C | 2 min | 1 X |
1 A temperatura de hibridização depende da temperatura denaturação (melting) do oligonucleotídeo empregado.
2 O tempo de elongação depende do tamanho do fragmento que se pretende amplificar. Recomenda-se 1 min por kb.
TRANSPORTE E ARMAZENAGEM
Transportado em blue ice
Armazenada à -20 °C.