Taq Pol DNA Polymerase (+)MgCl2 (500 unidades)

Código: POL100S - Referência: TAQ POL

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Taq Pol é a enzima DNA polimerase recomendada para reações de PCR de rotina. É otimizada para alta especificidade e garante mínima formação de produtos inespecíficos. O sistema de tampão é recomendado para PCR baseado em placa e pipetagem automatizada. A atividade replicativa de DNA acontece a 72˚C. Cataliza a polimerização de nucleotídeos em dupla fita de DNA na direção 5'→ 3' na presença de magnésio. Também possui atividade exonuclease no sentido 5'→ 3' dependente de polimerização, mas a atividade exonuclease 3'→ 5' é ausente.

Definição de unidade

Uma unidade é definida como a quantidade de enzima requerida para catalisar a incorporação de 10 nmoles de dNTPs em uma forma ácido-insolúvel em 30 minutos a 70 °C.

Amplificação superior - até 1 pg de molde
 
Amplificação até 5 kb

 

 

CONTEÚDO

Taq Pol (tampa azul)

5 unidades/µL Taq DNA polimerase em 20 mM Tris-HCl, 100 mM KCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0.5% Tween-20, 0.5% Nonidet P-40, 50% glicerol (v/v), pH 8.0 (25 °C)

 

Taq Reaction Buffer complete 10x (tampa vermelha)

200 mM Tris-HCl, 500 mM KCl, 20 mM MgCl2, pH 8.5 (25 °C)

 

MgCl2 Stock Solution (tampa amarela)

25 mM MgCl2

 

 

PROTOCOLO

Apenas para uso in vitro!

 

O procedimento de PCR descrito abaixo emprega volumes para uma reação de 50 μL. Para múltiplas reações, prepare um master mix contendo todos os componentes comuns a todos as reações e dispense o volume apropriado em cada tudo de PCR. Na sequência, adicione o DNA molde e os oligos respectivos.

 

Ensaio recomendado: 50 µL

Componente [ final ] Volume
10x Taq Reaction Buffer complete (tampa vermelha) 1 X 5 µL
10 mM dNTPs 200 µM 1 µL
10 µM Oligonucleotídeo senso 0.2 µM 1 µL
10 µM Oligonucleotídeo antisenso 0.2 µM 1 µL
DNA molde 10 pg - 1 µg** variável
Taq Pol (tampa azul) 1 - 2.5 unidades 0.2-0.5 µL
Água grau PCR   q.s.p 50 µL
     

**DNA genômico: 1 ng-1μg; DNA plasmidial ou viral: 1 pg-1 ng

 

Otimização da concentração de MgCl2

O tampão de reação 10x concentrado contém 20 mM de MgCl2, resultando em 2 mM na reação, concentração recomendada para maioria das aplicações. Para otimização, adicione MgCl2 da solução estoque conforme indicado na tabela abaixo.

 

MgCl2 Stock Solution 1 µL 2 µL 4 µL
[ final ] MgCl2 2.5 mM 3 mM 4 mM
       

 

Condições de ciclagem recomendadas

Denaturação inicial 95 °C 1 min 1 X
Denaturação 95 °C 15-30 s 30 X
Hibridização1 45-68 °C 15-30 s
Elongação2 72 °C 30 s - 4 min
Elongação final 72 °C 2 min 1 X
       

1 A temperatura de hibridização depende da temperatura denaturação (melting) do oligonucleotídeo empregado.

2 O tempo de elongação depende do tamanho do fragmento que se pretende amplificar. Recomenda-se 1 min por kb.

 

 

TRANSPORTE E ARMAZENAGEM

Transportado em blue ice

Armazenada à -20 °C.

 

 


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